培养过程中发生重组基因的丢失造成的? 结构不稳定:? 指由于基因的突变造成的Р 研究基因工程菌的不稳定性? 连续培养方式Р3.2 基因工程菌的稳定性Р1 工程菌稳定性对群体组成变化的影响?●工程菌的脱落性不稳定的模型?假定:? 质粒丢失的概率为p,? 重组菌和质粒丢失的宿主菌的比生长速率恒定(分别为μ﹢和μ-),? aS+X﹢→(2- p) X﹢+X-? bS+X-→2X-?式中S为限制性基质浓度,X﹢和X-分别为带有和丢失质粒菌体的浓度(初始浓度为X0﹢和X0-),a、b为系数Р经n次传代后,重组菌在培养液中的比例为:Р(3-1)Р式中α=μ-/μ﹢,由于宿主菌更具生长优势,2﹥α﹥1? μ- =0,? 反映了营养缺陷型宿主丢失了质粒中合成有关缺陷的营养物质的酶? μ-﹤0? 反映了重组菌丢失其耐药性被杀死的情况Р带质粒pYEαa4的酿酒酵母:? 质粒丢失的速率(以葡萄糖为限制性基质)? 基本培养基﹥复合培养基? 基本培养基: μ的差异? 复合培养基: μ的差异及质粒丢失的速率?■不同的限制性基质对重组菌存在不同的影响?大肠杆菌GM31(pBR325)在连续培养中:?限制性基质影响? 低μ(0.15-1) 高μ(0.55-1)?葡萄糖 10代无四环素抗性 40代开始丢失质粒?氯化铵 100代未失去抗性 10代开始失去耐药性Р重组菌GY2345(pBR325)则表现不同Р■质粒在不同的宿主中,有不同的稳定性? 质粒pBR325在不同的宿主大肠杆菌中:? 限制性基质:葡萄糖、镁盐、磷酸盐? 稳定性有很大差异? 葡萄糖和磷酸盐限制时最易发生质粒不稳定性? 可能是它们提供合成DNA的材料和能量Р●比生长速率μ? 在一定温度和pH下,限制性基质浓度是决定μ的主要因素? 重组菌的μ对质粒的稳定性有很大影响?大肠杆菌W3110(pEC901):? 分批补料培养中:不存在质粒的稳定性问题
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