:R-CH--COO-+2HCHO?-NH3是弱酸,完全解离时pH在11-12之间或者更高,若用碱滴定- NH3释放出来的H+来测定氨基酸,一般指示剂的变色范围<10,很难指示滴定终点。? 但是用甲醛处理后,由于甲醛能与氨基结合使氨基上的氢离子游离,使溶液中的酸度增加,滴定中和终点移至酚酞的变色区域内(8.0-10.0)。因此可用酚酞作指示剂,用碱来滴定,从而计算氨基酸的含量。?试剂:1mol/l盐酸,0.1mol/l氢氧化钠标准溶液,0.5mol/l氢氧化钠标准溶液,12%中性甲醛,0.2%甲基红指示剂,1%酚酞指示剂。?仪器及器具:100ml三角瓶,10ml刻度吸管,25ml刻度吸管,碱式滴定管Р 取发酵离心上清液2.5ml至100ml三角瓶中,加水50ml,甲基红指示剂2滴,1mol/l盐酸1-2滴,调节溶液至红色,静置5分钟,再用0.5mol/l的氢氧化钠标准溶液调节溶液至橙色(体积不计),使呈中性。加12%中性甲醛10ml(每次用之前用氢氧化钠溶液调至微红色,酚酞作为指示剂),摇匀静置10min,加1%酚酞指示剂5滴,用0.1mol/l氢氧化钠溶液滴定至微红色为终点。?计算:氨基氮(mg/100ml)=C×V×14.01×100/2.5? C:氢氧化钠滴定液浓度,mol/l? V:氢氧化钠滴定液消耗体积,mlР3.6.3 OD法测菌体密度Р 原理:OD表示被检测物吸收掉的光密度。光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。?实验步骤Р首先对配好的培养基进行检测光密度,以此作为对照。? 其次,用三支试管取10的样品液,分别用磷酸盐缓冲液稀释稀释不同的倍数,?用wfj7200可见分光光度计在波长600nm下测定不同稀释不同稀释倍数的菌悬液以及对照样品的OD值。? 计算:OD=㏒10(入射光/透射光)
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