粘度成反比;与颗粒所带电荷成正比。1 )电荷效应nDNA分子在凝胶介质中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖一磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极方向移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即DNA分子本身的大小和构型。2)分子筛效应n具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样,可进行分离。DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同相对分子质量的DNA,也可以分离相对分子质量相同。n在凝胶电泳中,DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。质粒DNA样品用单一切点的酶切后与已知相对分子质量大小的标准DNA片段进行电泳对照,观察其迁移距离,就可获知该样品的相对分子质量大小。凝胶电泳不仅可以分离不同相对分子质量的DNA,也可以鉴别相对分子质量相同但构型不同的DNA分子。表琼脂糖浓度与DNA分离范围3)构型n在抽提质粒DNA过程中,由于各种因素的影响,使超螺旋(SC)的共价闭合环状结构的质粒DNA的一条链断裂,变成开环状(0C)分子,如果两条链发生断裂,就转变为线状(L)分子。这3种构型的分子有不同的迁移率。在一般情况下,超螺旋型分子迁移速度最快,其次为线状分子,最慢的为开环状分子。当提取到的质粒DNA样品中还有染色体DNA或RNA时,在凝胶电泳上也可以分别观察到电泳区带, 由此可分析样品的纯度。不同构像质粒2.支持物介质nDNA的凝胶电泳常使用两种支持材料:琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶。通过这两种介质的浓度变化调整所形成凝胶的分子筛网孔大小,分离不同分子量的核酸片断。琼脂糖的孔径大,可以分离长度为100bp至60kb的核酸片断;聚丙烯酰胺凝胶的孔径小,可分离小片断(5-50bp)的核酸。
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