n):加热至90-96oC,DNA 双链模板变成单链 2.退火(annealling):缓慢降温至30-65oC,引物与单链DNA模板互补结合 3.延伸(extention):升温至70-74oC, DNA链延伸(需TaqDNA聚合酶, dNTP,Mg) 循环30次,特异DNA产量达2拷贝(约10) PCR产物检测凝胶电泳凝胶成像仪核酸检测荧光定量PCR技术?在PCR反应体系中加入荧光物质,利用荧光信号累积实现了实时监测整个PCR进程,对起始模板进行定量分析的方法。 2014/10/14 9 登革热疫情 1.登革热(Dengue fever)是由登革病毒引起,经伊蚊传播的一种急性传染病,潜伏期通常约5-7天, 具有传播迅猛、发病率高等特点。患者有可能出现极度疲倦及抑郁症状,少数病者会恶化至登革出血热,并进一步出血、休克,乃至死亡,登革热引起的并发症往往是病人致死的主因。 2.中山大学达安基因股份有限公司申报的“登革病毒核酸检测试剂盒(PCR—荧光探针法)”近日获得国家食品药品监管总局批准上市。我国境内第一个获批上市的针对登革病毒核酸的检测试剂产品。 SYBR Green法 1.SYBR Green只有和双链DNA结合后才发荧光 2.变性时,DNA双链分开,无荧光 3.SYBR Green也能和非特异的双链DNA结合发光,所以必须在反应结束时做熔解曲线分析。 1.5′端标记有报告基团(Reporter, R) ,如FAM、VIC等 2.3′端标记有荧光淬灭基团(Quencher, Q) 3.探针完整,R所发射的荧光能量被Q基团吸收,无荧光,R与Q分开,发荧光 4.Taq酶有5′→3′外切核酸酶活性,可水解探针探针法荧光定量PCR扩增曲线图 1.扩增曲线 2.Ct值 2014/10/14 10 作业 1.比较生化检测法及分子生物学检测法的优缺点。 2.PCR技术的原理及应用。
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