蛋白质的改造Р对蛋白质分子的改造主要包括2个方面:?蛋白质分子的理性改造Р蛋白质分子的非理性改造?非理性改造+筛选=定向进化Р蛋白质的理性改造Р定点突变Р拼接Р重头设计Р基于Dpn I的快速定点突变方法Р盒式突变:?利用目标基因序列中适当的限制酶切位点,插入各种合适的突变DNA片段,用以取代目标基因中特定DNA片段。Р将2个或多个不同的模块连接成一个大分子,起连接作用的氨基酸片断为融合蛋白接头(linker)。?如:(GGGGS)3Р融合表达РIntein是一个自我拼接的蛋白质元件,类似于基因组中的内含子intron在RNA的剪接中所起的重要作用。Intein如同一个插入前体蛋白的肽段,进行自我切除,并用一个肽键将两端的蛋白(extein)连接起来。Р内含肽介导的蛋白质连接Р通过改变裂解条件以及对内含肽进行适当修饰,可以生物合成C端带有硫酯键或N端带有半胱氨酸的蛋白质分子。两种蛋白混合后,硫酯键和半胱氨酸发生自发连接反应,形成肽键,从而将两种蛋白连接起来。Р全新蛋白质设计Р指基于对蛋白质折叠规律的认识,从氨基酸的序列出发,设计制造自然界种不存在的全新蛋白质,使之具有特定的空间结构和预期的功能。Р蛋白质的定向进化Р蛋白质分子定向进化的原理? 蛋白质分子定向进化的策略? 蛋白质分子定向进化的应用
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