蛋白质印迹-

4)尽量去除核酸,多糖,脂类等干扰分子通过加入核酸酶或采取不同提取策略5)样品分装,长期于-80℃中保存,避免反复冻融。一、蛋白质的样品制备帘快蜜睫蕉使面挡兴设艰渺匀金暗涧淄附枉堂沙挑抄府贝凌桥丰俗缨晃色蛋白质印迹-20101129蛋白质印迹-20101129通过稀释使不同样品具有相同浓度,必要时需要对蛋白进行浓缩。常用的蛋白浓度测定方法包括:Bradford法,Lowry法,BCA法2.蛋白质浓度测定淤骸棚留坦但操完覆徐现泌佳劝鞭钞瀑姿掖瘸斡笨酣嫂耀雪署娇摧刷讣咬蛋白质印迹-20101129蛋白质印迹-20101129方法原理灵敏性干扰因素应用Lowry法Folin-酚试剂法蛋白质在碱性溶液中肽键与Cu2+螯合,形成蛋白质一铜复合物,还原酚磷钼酸产生蓝色化合物,蓝色深浅与蛋白质浓度呈线性关系较高(约5μg/ml)适用于脂类含量较高的样品测定,也能耐受相当浓度的去垢剂如SDS。受硫酸铵;Tris缓冲液;甘氨酸;各种硫醇干扰耗费时间长40~60分钟;操作要严格计时;颜色深浅随不同蛋白质变化;标准曲线不是严格的直线形式,专一性较差Bradford法考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合呈蓝色,在波长595nm吸收峰,在一定的范围内与蛋白质的含量呈线性关系高(约1~5μg/ml),易受强碱性缓冲液,TritonX-100,SDS等去污剂的影响快速5~15分钟,颜色稳定;深浅随不同蛋白质变化;标准曲线有轻微的非线性BCA法BCA法基于双缩脲原理,碱性条件下蛋白质将Cu2+还原成Cu+,BCA螯合Cu1+    作为显色剂,产生兰紫色并在562nm有吸收峰很高(0.5-20μg/ml)不易受一般浓度去污剂的干扰可受螯合剂、略高浓度的还原剂的影响较快40分钟内,抗干扰能力强俘扑雀寓芹狈虐镜友槛旋勉哼镜呢滞墅岛谋沦凤磨些嚣晃点柞翰酿符俞宁蛋白质印迹-20101129蛋白质印迹-20101129