第四章生物化学与分子生物学技术实践Р第一节生物成分的分离与测定技术Р蛋白质的分离与纯化Р蛋白质的性质?蛋白质分离和纯化?蛋白质的分离步骤?蛋白质的纯化方法?蛋白质含量的测定?蛋白质纯度等的测定Р蛋白质存在于生物体的组织细胞中,不同的生物体组织细胞所含的蛋白质种类、数量也不尽相同。Р一、蛋白质的性质Р蛋白质与多肽一样,能够发生两性离解,也有等电点。在等电点时,蛋白质的溶解度最小,在电场中不移动。?在不同的pH环境下,蛋白质的电学性质不同。在等电点偏酸性溶液中,蛋白质粒子带负电荷,在电场中向正极移动;在等电点偏碱性溶液中,蛋白质粒子带正电荷,在电场中向负极移动。这种现象称为蛋白质电泳。Р1 、蛋白质的两性离解和电泳现象Р由于蛋白质的分子量很大,它在水中能够形成胶体溶液。蛋白质溶液具有胶体溶液的典型性质,如丁达尔现象、布郎运动等。?由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透膜,因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。Р2 、蛋白质的胶体性质Р蛋白质胶体溶液的稳定性与它的分子量大小、所带的电荷和水化作用有关。?改变溶液的条件,将影响蛋白质的溶解性质?在适当的条件下,蛋白质能够从溶液中沉淀出来。Р3 、蛋白质的沉淀作用Р蛋白质的性质与它们的结构密切相关。某些物理或化学因素,能够破坏蛋白质的结构状态,引起蛋白质理化性质改变并导致其生理活性丧失。这种现象称为蛋白质的变性。Р4 、蛋白质的变性Р蛋白质的变性Р变性蛋白质通常都是固体状态物质,不溶于水和其它溶剂,也不可能恢复原有蛋白质所具有的性质。所以,蛋白质的变性通常都伴随着不可逆沉淀。引起变性的主要因素是热、紫外光、激烈的搅拌以及强酸和强碱等。
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