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蛋白质的显色反应

上传者:业精于勤 |  格式:docx  |  页数:7 |  大小:0KB

文档介绍
РРР多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸,所以呈黄色反应,苯丙氨酸不易硝化,须加入少量浓硫酸才有黄色反应。Р(2)试剂 Р①鸡蛋清溶液(将新鲜鸡蛋清用6层纱布过滤,然后按鸡蛋清:水=1:20配制而成。РР②大豆提取液:将大豆浸泡充分吸胀后研磨成浆状再用纱布过滤。 ③头发。④指甲。 ⑤%苯酚溶液。⑥浓硝酸。⑦%色氨酸溶液。⑧%酪氨酸溶液。⑨10%氢氧化钠溶液。Р(3)操作Р向7个试管中分别按下表加入试剂,观察各管出现的现象,有的试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后,于室温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性,观察颜 色变化(1 ~4管可能需要加热)。Р管号Р1Р2Р3Р4Р5Р6Р7Р材料Р鸡蛋清溶液Р大豆提取液Р指甲Р头发Р%苯酚Р%色氨酸Р%酪氨酸Р浓硝酸Р4滴Р4滴Р少许Р少许Р4滴Р4滴Р4滴Р现象1РРРРРРРР现象2РРРРРРРР4、考马斯亮蓝反应Р(1)原理Р考马斯亮蓝G250(R250)具有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中,其以游离态存在呈棕红色;当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。Р它染色灵敏度高,比氨基黑高3倍。反应速度快,约在2分钟左右时间达到平衡,在室温一小时内稳定。在 ~蛋白质范围内,蛋白质浓度与A595nm值成正比。所以常用来测定蛋白质含量。Р(2)试剂Р①蛋白质溶液(鸡蛋清:水=1:20配制而成)。②考马斯亮蓝溶液:考马斯亮蓝G250100mg溶于50mL95%乙醇中,加100mL85%磷酸混匀,配成原液。临用前取原液15mL,加蒸馏水至100mL,用粗滤纸过滤后,最终浓度为%。Р(3)操作РР取两支试管,按下表操作Р管号 试剂Р蛋白质溶液(mL)Р蒸馏水(mL)Р考马斯亮蓝染液(mL)Р1Р0Р1Р5Р2РРР5РРР结果分析:要分析结果,为什么出现这样的结果,什么原因导致的?Р     实验报告不能用铅笔写。

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