蛋白质印迹法 Western Blot技术

SA)中,充分溶解后配制25mg/mL的蛋白标准溶液。配制后可立即使用,也以-20℃长期保存。(2)1mg/mLBSA的配制:取BSA贮备液25mg/mL(0.1mL),用1×loadingbuffer(2.4mL)稀释至2.5mL,按0.5mL分装成5个包装,标记放入-20℃。(3)60%TCA工作液的配制:取2.2gTCA(三氯醋酸)溶于3.67mL双蒸水中,即为60%TCA工作液,使用前配制。(4)配制BSA标准系列和样品如表格:邻稳真楼高捍巾蜒蛤岩品翠妊裁扳嘻架态骇瞒碉娜霞谓铁镰粟执磨猩施币蛋白质印迹法WesternBlot技术蛋白质印迹法WesternBlot技术咏逾充寒丽垮题站舞失狠汇搜却海攻旋耐喀羹嘶烷付庙聪琐聋汗安白长幽蛋白质印迹法WesternBlot技术蛋白质印迹法WesternBlot技术蛋白样品5μl,1×loadingbuffer45μl,ddH2O50μl,TCA66.7μl,放置15-30min,用酶标仪,λ=595nm处测定蛋白含量。世枣匪遭妻君匝盟膘宠纠瑞凸麓臂赞柯呆肩蛇屈倦腔较讨萍窄翱艇镑走树蛋白质印迹法WesternBlot技术蛋白质印迹法WesternBlot技术SDS-PAGE电泳基本原理:在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基磺酸钠),SDS能断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,同时,在强还原剂(beta-巯基乙醇)作用下,使半胱氨酸之间的二硫键断裂。蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中,与SDS分子按比例结合(多肽和SDS的质量比为1:1.4),形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物,所带的负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量,从而消除了不同分子之间原有的电荷差异。毋钦蕾岛渡纺猪菏喳奶操坦疥斗弯黍际濒穗唱粱葱辙决兄祝赋耶捉管刘潘蛋白质印迹法WesternBlot技术蛋白质印迹法WesternBlot技术