下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收,再以标准碱滴定,就可计算出样品中的氮量.由于蛋白质含氮量比较恒定,可由其氮量计算蛋白质含量,故此法是经典的蛋白质定量方法.?凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热,经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程,最后有机氮转变为无机氮硫酸铵,这一过程称为有机物的消化.为了加速和完全有机物质的分解,缩短消化时间,在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、氧化汞、过氧化氢等试剂,加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解,除硫酸钾外,也可以加入硫酸钠、氯化钾等盐类类提高沸点,但效果不如硫酸钾.硫酸铜起催化剂的作用.凯氏定氮法中可用的催化剂种类很多,除硫酸铜外,还有氧化汞、汞、硒粉、钼酸钠等,但考虑到效果、价格及环境污染等多种因素,应用最广泛的是硫酸铜.使用时常加入少量过氧化氢、次氯酸钾等作为氧化剂以加速有机物氧化.消化完成后,将消化液转入凯氏定氮仪反应室,加入过量的浓氢氧化钠,将NH4+转变成NH3,通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接受瓶内,硼酸接受氨后,形成四硼酸铵,然后用标准盐酸滴定,直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度.滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数,通过计算即可得出总氮量.在滴定过程中,滴定终点采用甲基红-次甲基蓝混合指示剂颜色变化来判定.测定出的含氮量是样品的总氮量,其中包括有机氮和无机氮.РР硫酸铜与氢氧化钠先生成氢氧化铜浅蓝色,与过量氢氧化钠生成绛蓝色的铜酸钠深蓝色,铜酸钠不稳定见光分解成氧化铜黑色?如果未变色或者颜色淡,那应该是加碱量不组,这种情况不能完全蒸馏出NH4,也滴定不出来或者结果偏小.?РР建议如下操作:1 检查NAOH浓度? 2 检查设置加碱量? 3 在蒸馏之前用空的消化管和锥形瓶运行2~3次过程
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