物质解聚得到释放。?酚虽可有效的变性蛋白质,但是它不能完全抑制 RNA 酶活性, 因此 Trizol 中还加入了 8-羟基喹啉、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源 RNase 。 http://jpkc./sfzx/ http://jpkc./sfzx/ ?在加入氯仿离心后,氯仿比重大,使溶液分为水相、中间层和有机相。 RNA 在上层水相中, DNA 和蛋白质位于中间层,有颜色的下层为有机相。?取出水相用异丙醇沉淀可回收 RNA ;用乙醇沉淀中间层可回收 DNA 。原原理理 http://jpkc./sfzx/ http://jpkc./sfzx/ RNA RNA 酶污染来源酶污染来源?RNA 酶可耐受多种处理而不被灭活,如煮沸、高压灭菌等。?严格控制外源性 RNA 酶的污染: 外源性的 RNA 酶存在于操作人员的手汗、唾液等,也可存在于灰尘中,造成器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂的污染。?最大限度地抑制内源性的 RNA 酶:而各种组织和细胞中则含有大量内源性的 RNA 酶。 http://jpkc./sfzx/ http://jpkc./sfzx/ 常用的常用的 RNA RNA 酶抑制剂酶抑制剂 1.焦碳酸二乙酯(DEPC) 是一种强烈但不彻底的 RNA 酶抑制剂。它通过和RNA 酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性。 2.异硫氰酸胍目前被认为是最有效的 RNA 酶抑制剂,它在裂解组织的同时也使 RNA 酶失活。它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白体中解离出来,又对 RNA 酶有强烈的变性作用。 3.RNA 酶的蛋白抑制剂(RNasin) 从大鼠肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。 RNasin 是RNA 酶的一种非竞争性抑制剂,可以和多种 RNA 酶结合,使其失活。 4.其他 SDS 、尿素、硅藻土等对 RNA 酶也有一定抑制作用。
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