ad MJ mini)?台式离心机?灭菌的薄壁离心管?微量加样枪?凝胶电泳系统等?凝胶成像系统Р一、实验仪器РРРРР1、 菌液：DNA模板?大肠杆菌DH5a菌株(含靶基因CHD5片段的pMD19-T)Р二、实验材料Р抑癌基因РРР2、引物： 正向引物： 5’ GTA AAA CGA CGG CCA GT 3’? 反向引物: 5’ CAG GAA ACA GCT ATG AC3’?3、2×Premix ：? Taq酶：5U/μl ? 4×dNTP: 10mM each? 10×buffer: 500mM KCl , 100mM Tris-HCl (pH 8.3)? MgCl2: 25mM?4、灭菌去离子水Р二、实验材料РР① 94℃预变性2 分钟后开始以下循环?② 94℃ 30 秒? 55℃ 30 秒 30 循环? 72℃ 60 秒?③ 72℃ 8 分钟；?④ 4 ℃ 保温。?实验过程约1小时30分钟РР三、实验步骤РРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРР温度（℃）Р时间（min）Р94??72?50РРРРРР94℃变性（30s）Р50 ℃退火（30s）Р72 ℃延伸（60s）РРР循环1 循环2 循环3РPCR反应的温度循环周期?PCR 反应的每一个温度循环周期都是由DNA变性、引物退火和反应延伸三个步骤完成的。图中设定的反应参数是94℃变性30s， 50℃退火30s， 72 ℃延伸60s。如此周而复始，重复进行，直至扩增产物的数量满足实验需求为止。РDNA变性?形成2条单链РDNA单链?与引物复性Р子链延伸?DNA加倍
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