Р1mgР0-0.05μgР骨Р1mgР脂肪Р1mgР高丰度Р成纤细胞Р105Р0.5-1μgР人白细胞Р105Р中丰度Р酵母Р105Р0.5-1.5μgР拟南芥叶片Р1mgР0.2-0.5μgР低丰度Р烟草叶片Р1mgР0.05-0.1μgР玉米叶片Р1mgРRNA相关知识及提取原理--RNA的裂解原理Р异硫氰酸胍/苯酚法Р细胞在变性剂异硫氰酸胍的作用下被裂解,同时核蛋白体上的蛋白变性,核酸释放?释放出来的DNA和RNA由于在特定pH下溶解度的不同而分别位于整个体系中的中间相和水相,从而得以分离Р胍盐/β-巯基乙醇法Р盐酸胍裂解样本,抑制RNase的活性Рβ-巯基乙醇变性蛋白РRNA相关知识及提取原理--RNA吸附原理Р吸附材料Р纯化原理Р硅基质Р高盐低pH值结合核酸?低盐高pH值洗脱Р阴离子交换树脂Р低盐高pH值结合核酸?高盐低pH值洗脱Р磁珠Р磁性微粒挂上不同基团可吸附并携带RNAР沉淀法?介质吸附РRNA相关知识及提取方法原理?RNA提取流程?实验举例及实验中注意点?特殊组织RNA的提取?RNA的评价与鉴定?RNA的保护РRNA提取流程Р1、样本前处理Р2、细胞裂解Р3、 RNA的纯化及获得РRNA提取流程-- 样品前处理注意点Р选择新鲜血液,不得超过4小时Р选择新鲜的幼嫩组织Р选择处于生长旺盛的时期收集细胞Р选择新鲜组织,生长旺盛的组织Р可将新鲜血液先进行红细胞裂解,得到的白细胞?然后加入一定量的TRNzol,-70℃保存较长时间Р去掉培养基,加入一定量TRNzol?-70 ℃保存较长时间Р推荐使用专门的RNA样品?储存液进行储存Р液氮或加入RNase抑制剂中保存,?避免反复冻融РRNA提取流程-- 样品前处理中如何保存样本Р样品的前处理方式РRNA提取流程?样本前处理的目的:离散,均一,细胞集或细胞液Р液氮研磨Р匀浆或液氮研磨Р应用红细胞裂解液处理Р蛋白酶K处理
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