组织总RNA抽提

组织总RNA抽提Р交大医学院检验系生化教研室?陈宁РRNA简介РRNA? 腺嘌呤(A)? 尿嘧啶(U)? 胞嘧啶(C)? 鸟嘌呤(G)? 四种核苷酸串联组成的单链。РA-UРG-CРDNAР胸腺嘧啶(T)РRNA的主要类型有三种:? 信使RNA(mRNA) 转录DNA上的遗传信息? 核糖体RNA(rRNA) 与蛋白质结合形成核糖体,形成细胞内蛋白质合成的场所? 转移RNA(tRNA) 运输被激活的氨基酸,翻译mRNA上的氨基酸序列Р真核细胞中还存在?不均一RNA (hnRNA)?小核RNA (snRNA)РtRNAРmRNA与蛋白质的表达具有关联性。? 控制生物性状的基本单位是基因,而生物性状的表达则主要通过蛋白质。? 研究发现,所有基因均先转录成mRNA,再翻译成蛋白质。Р生物遗传中心法则Р细胞内RNA转录过程Р与RNA有关的研究方法РRT-PCR ? mRNA通过RT-PCR(逆转录-PCR),可建立相应cDNA文库?RNA序列分析? 潜在基因分析?Northern 杂交? 用于真核细胞中RNA表达和大小的检测分析(RNA-DNA探针)?RNA干扰技术(RNAi)? 通过双链小干扰RNA(siRNA)的形成,诱导同源mRNA降解Р组织RNA的抽提和纯化РRNA质量的标准? 完整性—避免外源性及内源性RNase对RNA的降解Р 均一性—有效去除抽提过程中残留的DNA、蛋白质和有机溶剂Р组织RNA抽提纯化方法РTRIzol试剂抽提法? 利用含异硫氰酸胍成分的TRIzol破碎组织细胞,并抑制细胞释放的核酸酶。Р硅胶膜纯化柱抽提法? 硅胶膜纯化柱能迅速特异地吸附样品裂解液中的RNA,无需酚氯仿抽提,不用乙醇等沉淀,只须不断洗脱即可得到高纯度的RNA。