其蛋白的稳定性;一种是融合蛋白的表达策略,将其构建到含有一段融合蛋白基因的表达载体上,使其在表达的过程中串联上一个大分子的融合蛋白, K33的分子量,一方面使其在宿主菌体内不易被降解。本论文从上述两种思路出发,通过不同的重组策略构建猪源胆囊收缩素基因工程蛋白。为进一步的主动免疫和被动免疫动物实验提供了大量的廉价的具有很好免疫原性的不同形式的人工抗原。并对进一步研究这些基因工程抗原之间自身免疫原性及在动物体内作用效果的差异,寻求最佳的人工抗原提供了前提。K名r种生理功能的研究提供了来源广泛价格低廉的研究材料,节约了研究成本,并为进一步大规模的应用于动物生产奠定了基础。四川大学硕士学位论文论文第一章猪胆囊收缩素--K33)基因的克隆及其四串联体的构建胆囊收缩素(K)在调节动物摄食方面发挥了重要的的作用,K33基因工程蛋白,K33基因,K33同向四串联体,增大分子量,使其具有免疫原性。本章实验提取猪十二指肠肠粘膜组织提取的总RNA,设计一对特异引物, 并在引物中设计一对^伪e厉口勋甜同尾酶酶切位点。以反转录得到的猪十二指肠 eDNA为模板,K33基因,并克隆入.pMDl8一T载体,挑选插入方向正确的重组子。并利用同尾酶酶切后,粘性末端可以首尾相连,同时连接位点不能再被这两个同尾酶识别的特性,通过反复的切割、连接,K33 四串联体基因。测序后,将其构建/x.pET28a表达载体,获得pET28a--4CCK33 重组表达质粒。 1.材料和方法 1.1材料 1.1.1组织来源、茵种、质粒屠宰场收集新鲜幼猪十二指肠组织,大肠杆菌宿主菌株Escherichia coli JMl09及BL21(DE3),表达载体pET28a均由本实验室保存。 1.1.2酶制剂 ExTaqDNA聚合酶、限制性内切酶Ndel,NheI,厨甜,Bd晰脚和赐“、 T4DNA连接酶、等均购自TaKaRa公司。 12
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