山东大学研究生国家精品课程基因克隆

基因克隆Р基因工程的基本过程Р目的基因的获得?载体DNA及其改造?体外DNA重组?重组DNA的转化?重组子的筛选、鉴定与克隆扩增?目的DNA在受体细胞中的表达Р基因克隆Р基因表达Р基因工程过程示意图Р①从细胞中分离出DNAР①Р②Р③Р④Р⑤Р⑥Р②限制酶截取DNA片断Р③分离大肠杆菌中的质粒Р④ DNA重组Р⑤用重组质粒转化大肠杆菌Р⑥培养大肠杆菌克隆大量基因/使其表达Р③Р③Р概述Р基因克隆(Gene cloning):是通过分子生物学技术获得一段基因或DNA片段的大量拷贝,从而对该基因进行研究或应用的过程和技术,又称为DNA克隆。?目的基因:基因克隆中所扩增的基因,又称为外源基因(foreign DNA)。?DNA重组:利用酶学的方法,在体外将不同来源的DNA进行特异性切割,并重新拼接,组合成一个新的杂合DNA分子的过程。Р一、目的基因的获得Р已知基因的获得?化学合成法?PCR扩增法?未知基因的获得?构建基因组文库利用鸟枪法克隆目的基因?构建cDNA文库,筛选目的基因?mRNA差异显示技术筛选差异表达基因?差异蛋白质谱表达技术筛选功能基因РI 已知基因的获得Р化学合成法?----DNA化学合成仪Р多聚合酶链反应(PCR)?----DNA 体外扩增技术РDNA合成仪РPCR扩增仪РOligo DNA的人工化学合成是从1967年以后开始兴起的。随着科学技术的进步,DNA合成仪的完善,现在一般都采用固相亚磷酸三酯法,使用全自动DNA合成仪进行Oligo DNA的合成。Oligo DNA合成是由3'→5'进行合成的,一般3'的第一个碱基结合在Glass担体(Controlled Pore Glass,CPG)上。Р1、化学合成法Р核酸?脱氧核糖核酸(DNA), 核糖核酸(RNA)