色,可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋白的分子量,可筛选阳性表达的重组体。荿第二节材料、设备及试剂袆一、材料肆不同来源的模板DNA;膄E.coliDH5α菌株:Rˉ,Mˉ,Ampˉ;螀E.coliBL21Plyst(DE3)FˉompThsdSB(rBˉmBˉ)galdcm(DE3);薈琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒:购自BeijingTianweiCorporation。袅本实验所用的特异引物:芃表2-1设计Cry1Ac结构域基因特异引物膁羆引物序号薄引物序列莃1莈5'-GGGTGGAGAAAGAATA-3'螈2莃5'-CGCGTCGACATGTCGATGGGAAGTG-3'蒃3蝿5'-GGATTGGGTAAGGTAT-3'膆4莆薃5膀5'-GGTTCGTGTACGGTATG-3'袇6膅5'-TAGTTGGT-3'薃7薀莅8羃蚃9羁5'-AATCTC-3'肇羆螃表2-2Cry1Ac结构域菌体阳性克隆子的引物肈引物名称蝿引物序列螅T7袃5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'葿SP6芇5'-GATTTAGGTGACACTATAG-3'薄羂注:Tm=4(C+G)+2(A+T)袀二、设备罿PCR小管;离心管;DNA扩增仪(PE公司或eppendorf);琼脂糖凝胶电泳所需设备(电泳槽及电泳仪);台式高速离心机;恒温振荡摇床;高压蒸汽消毒器(灭菌锅);涡旋振荡器;恒温水浴锅;台式高速离心机;微波炉或电炉;紫外透射仪;数码相机及其附件;电热恒温培养箱;无菌工作台;低温冰箱;制冰机;分光光度计;微量移液枪(20μl,200μl,1000μl)及吸头;电热恒温鼓风干燥箱;蛋白电泳系统ProteawIIBio-Rad;超声波破碎仪;Millipore纯水仪;空气浴振荡器;电子天平。芃三、试剂:肂1、限制性内切酶(BamHI,SalI,NdeI)芁2、10×PCR反应缓冲液
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