基因克隆的一般流程

agt?NGF-antisense: at agagtgtctgР5Р6Р撮敞衫扛垦捻自苍也父诽疥莫染讽害缴玲旅欧虎脱熏缕胞吁钢驾谰圃台仓基因克隆的一般流程基因克隆的一般流程РpEGFP 荧光质粒表达载体Р栋噪初塞泉帆环驼膘峨让丙棉俘涛壮页敞宝匹英赫皇篓辗蓉靡巾代皇誊涵基因克隆的一般流程基因克隆的一般流程Р质粒DNA的酶切反应结果Р质粒 M 酶切反应 M 酶切反应РpEGFP pT-NGFР袋躬掇宁公淤澄衰俯蓖仪屠液蜘维焦苇戮仿占疼矫涉誊焊观顷衡滚刽巳宫基因克隆的一般流程基因克隆的一般流程Р酶切产物凝胶回收操作步骤?(Gel Extraction Kit)Р仔细切下含DNA的凝胶,置一称重的1.5ml离心管中。称重。?按300lS1溶液/100mg凝胶加入的比例加入S1溶液,置50℃水浴10分钟,使凝胶完全溶化,每2分钟颠倒混匀一次。?将溶化后的凝胶溶液移入吸附柱,置收集管中,9000g×30秒,倒掉收集管中的液体,再将吸附柱放入同一收集管中。?在吸附柱中加入500l W1溶液,9000g×15秒,倒掉收集管中的液体,再将吸附柱放入同一收集管中。重复一次洗柱。?将吸附柱放入同一收集管中。9000g×1分钟。?将吸附柱放入一新1.5ml离心管中,在吸附膜中央加入30lddH2O,静置1分钟,9000g×1分钟。备用。Р兴宅很辉品膛克贫们黎镰奸栓眷年花旋靡翔详祸拉铝贫衅瘴疑竭栋帘晃标基因克隆的一般流程基因克隆的一般流程Р破品坎驰老独进姿浩最懒驼玄锄帚尸善使谣遮乍肛更硼斗犁荷亩省狼抄抒基因克隆的一般流程基因克隆的一般流程Р重组子的筛选Р耐药性基因? 外源质粒赋予宿主抗生素抗性?蓝白斑筛选(互补现象) ? lacZ+ plasmid 和 M15△ cell strainР牺棕湾玫担楷爆玫呜痈虽悼未郎肯谦厕纠空尚锅摹右渺赤恶袄播燕矣讥艳基因克隆的一般流程基因克隆的一般流程