…………………………………(A.1)式中:A1——试样中维生素K2(七烯甲萘醌)对应的峰面积;A2——标准品中维生素K2(七烯甲萘醌)对应的峰面积;c1——标准溶液中维生素K2(七烯甲萘醌)的浓度,单位为微克每毫升(µg/mL);V1——试样的定容体积,单位为毫升(mL);m1——试样的质量,单位为克(g)。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。顺式MK-7含量的测定试剂和材料维生素K2标准品(七烯甲萘醌)。四氢呋喃:色谱纯。无水乙醇:色谱纯。仪器和设备高效液相色谱仪:配备紫外光检测器。参考色谱条件推荐的色谱柱及典型操作条件见表A.1,其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。A.1色谱柱和色谱操作条件色谱柱L62填充柱,柱长25cm,内径4.6mm,粒径5μm柱温/℃25流动相水:无水乙醇:甲醇:四氢呋喃(1:15:80:10)流速/mL/min0.8检测波长/nm268进样量/μL20运行时间不少于维生素K2标准品保留时间的1.5倍分析步骤标准溶液的制备同A.4.4.1。试样溶液的制备同A.4.4.2。系统适用性试验进样标准溶液和试样溶液,全反式维生素K2(标准品)和顺式维生素K2的相对保留时间为1.0min和1.1min,两者之间的分离度应不小于1.5。测定将标准溶液和试样溶液20µL注入高效液相色谱仪中测定,以保留时间定性,峰面积外标法定量。结果计算顺式MK-7含量的质量分数wc,按式(A.2)计算:wc=rc/(rr+rc)×100%…………………………………………………(A.2)式中:rc——试样中顺式维生素K2对应的峰面积;rr——试样全反式维生素K2对应的峰面积。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。
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