果:比色法测定还原糖(Somogyi—Nelson)一、目的及原理还原糖与铜试剂作用后,与砷钼酸铵显色剂反应生成兰色,其溶液颜色深浅与糖含量成正比。此反应专一性强,反应产物稳定,垂观性好,测定范围为25~200mg。二、材料及用具葡萄、梨、甜椒、白菜、谷物等样品;无水碳酸钠、酒石酸钾钠、碳酸氢钠、硫酸铜、钼酸铵、亚砷酸钠、葡萄糖、无水碳酸钙;分光光度计、10、20、50、100及250ml容量瓶、0.5、1.0、2.5及25ml移液管、试管、称量瓶、滴定管、滤纸、水浴锅、分析天平。三、操作方法1.试剂制备:试剂I:铜试剂混合液(25A+1B、按体积)。A,25g无水碳酸钠、25g酒石酸钾钠、20克碳酸氢钠、200g无水硫酸钠、溶解在蒸馏水中,一种溶解后再加入另一种,溶解时可稍加热,最后定容到1000ml。B,15%的硫酸铜溶液:称取15克CuSO4·5H2O溶解在100ml蒸馏水中。试剂II:称取25g钼酸铵溶于450ml蒸馏水中,加21ml浓硫酸,将3g亚砷酸钠(Na2HAsO3·7H2O)溶于25ml水中,把上述二种溶液混合后,在37℃保温24~48小时,贮于棕色瓶并放暗处保存。使用这一溶液时,严禁用嘴吸取,须用橡皮球吸取。2.标准曲线的制备:标准葡萄糖溶液配制,取少许无水分析纯糖装在称量瓶中,于40~50℃干燥2小时,取出放干燥器内冷却。冷却后称取100mg溶于100ml水中,即成每ml含葡萄糖1mg的溶液。取上述溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml分别定容至100ml,上述各溶液每5ml含葡萄糖为0.025、0.050、0.075、0.100、0.125、0.150mg。标准曲线绘制:取上述溶液5ml,放入刻度试管中,加入试剂I(铜试剂混合液)1.0ml,于80℃水浴中加热保温20分钟,冷却后,加II(砷钼酸铵溶液)0.75ml,充分摇匀后,定容至
全文预览
