一定量脱脂小麦胚芽蛋白配制成一定浓度的蛋白悬浮液,调节恒温水浴锅为各酶最适温度,并用磁力搅拌器混匀,按相同加酶量在各酶最适pH值下水解,酶解过程中用1mol/L NaOH溶液保持pH值不变。反应结束后,90℃灭酶10min,10000r/min离心5min后取上清液调pH至中性备用分析。Р2.2.3小麦胚芽蛋白双酶分步水解工艺流程Р在2.2.2实验中可选出两种水解效果较好的蛋白酶。确定水解效果最好的蛋白酶为第一种添加酶,先按第一种蛋白酶的最适条件水解,水解到达终点后加热(90℃,10min)灭酶,将温度和pH值调至第二种蛋白酶的最适条件,酶解一定时间,灭酶(90℃,10min),10000r/min离心5min后取上清液调pH至中性备用分析。Р2.2.4水解度的测定Р采用pH-stat法[35]Р2.2.5肽含量的测定Р采用酸溶性肽含量测定法[32]Р2.2.6 DPPH•清除率的测定Р参照Shimada[36]的方法并略作改进。配制浓度为6.5×10-4mol/L的DPPH•甲醇溶液作为母液,并置于4℃冰箱避光保存。临用前用50%甲醇稀释10倍,然后将稀释后的DPPH•溶液、50%甲醇及测试样品按表2.2进行反应,并于DPPH•溶液的最大吸收波长517nm测样品的吸光度值。每个试样做三个平行,取其平均值。Р表2.2 DPPH·试样加样表РAРDPPH·溶液Р50%甲醇Р测试样РAoР4mLР0.8mLР-РAiР4mLР-Р0.8mLРAjР-Р4mLР0.8mLР样品对DPPH·清除率可表示为:РSA(%)=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%Р2.2.7还原能力的测定Р按照Oyaizu[37]的方法测定还原能力。将小麦胚芽蛋白水解物溶解在0.2mol/L,pH6.6的磷酸缓冲液中,取样品液2.5 mL加入试管,加入2.5 mL1%(w/v)铁氰化钾溶液,混合物于50
全文预览
