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蛋白质酶核酸的分离纯化

上传者:upcfxx |  格式:ppt  |  页数:97 |  大小:6553KB

文档介绍
他们采用的是用淀粉作为色柱里的填料。淀粉色谱法纸色谱法(发现了液-液即分配色谱法)Liquid-liquid(partition)Chromatography,LIC).他们用覆盖了吸附剂表面的并与流动相不发生混溶的固定液来代替以前仅有的固体吸附剂。提出色谱塔板理论突出贡献:预测气相色谱(1952年应用);提出用细小颗粒作填料,而两端可以加压(HPLC).1952年:马丁,辛格对分配层析的研究和发现,诺贝尔化学奖1952年,马丁同詹姆斯(James)一起,把这种技术原理应用在分离气体上。各种气体或蒸汽的混合物可以利用氮或氦一类情性载气的气流通过吸收性固体的表面。混合的气体通过后,在另一端出现时就分开了。这种气相色谱法特别有用高分辨率分析迅速检测灵敏自动记录缺点:热不稳定、难气化物质不适用但20世纪60年代以来,用气相色谱作为分析方法已经不能满足对生物成分分析测试的要求。于是人们就重新考虑采用液相色谱,即高效液相色谱(HPLC)。高效液相色谱采用了高压泵及填有很细的颗粒高效色谱柱。由于高效液相色谱通常采用紫外可见光度检测,因此高效液相色谱可以对大量有机化合物进行分析。它特别是对高沸点、高熔点、易分解物质的分析具有气相色谱不可替代的作用。高效液相色谱法与气相色谱法(l)气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物,它们仅占有机物总数的20%。对于占有机物总数近80%的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质,目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。(2)气相色谱采用流动相是惰性气体,它对组分没有亲和力,即不产生相互作用力,仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性的液体,选择余地大,它对组分可产生一定亲和力,并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此,流动相对分离起很大作用,相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数,这为选择最佳分离条件提供了极大方便。

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