制药工艺学天津大学化工学院制药工程系PharmaceuticalTechnology第十章微生物发酵制药工艺第十一章抗生素生产工艺第十二章氨基酸生产工艺第十三章维生素生产工艺第十四章基因工程制药工艺第十五章重组人干扰素生产工艺第十七章动物细胞培养制药工艺第十八章重组人红细胞生成素生产工艺第二篇生物技术制药工艺14.1基因工程制药微生物表达系统14.2基因工程大肠杆菌的构建技术14.3基因工程菌的发酵培养与控制第14章基因工程制药工艺基因工程技术-基因重组示意图酶切筛选鉴定DNA片段酶切、连接,形成重组DNA分子导入宿主细胞系统中扩增目标基因表达,生成新产物,出现新性状。14.2.1构建流程14.2.2目标基因的克隆14.2.3表达载体构建14.2.4工程菌构建14.2基因工程大肠杆菌的构建技术基因工程制药工程菌构建14.2.1工程菌构建流程目标基因克隆表达载体构建遗传转化与筛选工程菌酶切,连接外源基因导入与培养PCR,文库,化学合成基因工程制药工程菌构建新性状、功能、物质工作内容方法14.2.2目标基因的克隆策略目标基因:是编码蛋白质或多肽的DNA序列。正确克隆的重要性:只要有一个碱基发生(错义、无义、移码)突变,就导致编码氨基酸的变化,影响产物蛋白质的功能和生物学活性。只要一个碱基发生同义突变,就可能导致生产过程和效率变化基因工程制药工程菌构建核酸的一级化学结构有头:5’端磷酸有尾:3’端羟基骨架:戊糖连接的键:磷酸二酯键基因克隆方法的选择方法优点缺点PCR扩增简便快速,高效,数kb,单基因克隆DNA聚合酶活性和保真性限制文库筛选长片段,无碱基错误,未知序列基因克隆烦琐,过程复杂,耗时,昂贵化学合成简便,准确,已知序列,引物合成受合成仪性能限制,长度很短基因工程制药工程菌构建RT-PCR克隆目标基因流程反转录:起始材料RNAPCR:起始材料DNA基因工程制药工程菌构建
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