重组DNA技术是在分子水平对基因进行体外操作,因而也称为分子克隆(molecular cloning)或基因克隆。所谓克隆(clone):是指通过无性繁殖过程所产生的与亲代完全相同的子代群体。?分子克隆:是在体外对DNA分子按照既定的目的和方案进行人工重组,将重组分子导入到合适的受体细胞中,使其在细胞中扩增和繁殖,以获得DNA分子大量复制,并使受体细胞获得新得遗传特征的过程?基因工程:利用分子克隆技术来操作目的基因,并改变生物的遗传性状的过程就称为基因工程。基因工程最基本的必备的材料:?工具酶?载体?目的基因?原核或真核宿主细胞分子克隆的基本过程:?分:得到目的基因?切:将目的基因和载体用适当的限制性内切酶切割?接:将目的基因和载体连接,形成重组子?转:将重组子转到适当的宿主细胞中?筛:筛选出含正确重组子的宿主细胞,扩增第一节基因工程中常用工具酶工具酶分类1.使核酸降解的核酸酶类:核酸内切酶、核酸外切酶2.催化核酸合成的酶类:DNA聚合酶,RNA聚合酶,连接酶,逆转录酶3.核酸修饰酶类:甲基化酶,激酶,基团转移酶,磷酸酶等一、限制性核酸内切酶概念的提出及背景:30年代初,微生物学家发现,微生物的噬菌体不能交叉感染(“细菌免疫”)。?限制现象(限制性内切酶)?修饰现象(甲基化酶) 1962年W. Arber提出;菌体中含有2种以上功能不同的酶:?核酸内切酶(限制)?DNA甲基化酶(修饰)?限制性核酸内切酶(restriction endonuclease,RE) 是由细菌自己产生的一种能识别双链DNA中的特定序列,并以内切方式水解核酸中磷酸二酯键的核酸内切酶。
全文预览