对无害的目的基因的宿主细胞可以在IPTG存在下持续生长,pLysE对这些细胞蛋白表达的有效阻滞作用在某些情况下是一个有用的特点。pLysS和pLysE溶原菌对带毒性基因的载体的耐受性有所提高:不稳定的质粒变得稳定,无法构建成功的质粒能够获得和表达。pLysE造成细胞生长缓慢并有裂解倾向,在大多数情况下使用不便。对于毒性极大的基因,带有T7lac启动子的质粒和pLysS宿主菌是最佳选择。有pLysS (或pLysE)存在时制备细胞抽提物特别方便。目的蛋白表达后,收集细胞并重悬于50 mM Tris-HCl,2 mM EDTA,pH 8.0缓冲液。简单冻融,或加入0.1% Triton X-100,细胞内的T7 溶菌酶即可有效裂解细胞。PopCulture?和BugBuster?蛋白抽提试剂可以帮助带有pLysS和 pLysE质粒的菌株充分释放蛋白。这个特点使带有pLysS质粒的细胞在即使不特别要求目的质粒稳定性的情况下,仍然不失为一种不错的选择。注意,在利用重组子带有信号序列分离细胞周质部分蛋白时,建议不使用pLysS或pLysE质粒(因为宿主产生的T7溶菌酶会使细胞膜崩溃)。载体与宿主菌共同影响表达水平实际操作中,通常需要尝试多种不同载体/宿主菌组合以期获得拥有正确结构的目的蛋白的高水平表达。当使用“普通” T7启动子时,pLysS提供的低水平溶菌酶对T7 RNA聚合酶诱导后的目的蛋白表达影响很小,只是在出现目的基因产物时有短时延滞。显然,产生的T7 RNA聚合酶比被少量溶菌酶抑制的要多。(估计诱导时溶菌酶水平有所提高,因为T7 RNA聚合酶能够开始使pLysS 质粒基因完全转录产生溶菌酶mRNA 。但是,φ3.8 启动子是相对较弱的启动子(McAllister et al.,1981),主要转录仍然来自于目的质粒采用的强启动子φ10。)当采用T7lac启动子时,我们观
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