单克隆抗体与基因工程抗体的制备PPT演示

y)?第二代抗体单克隆抗体(monoclonal antibody)?第三代抗体基因工程抗体(ic engineering antibody)Р杂交瘤技术的基本原理Р单克隆抗体的制备? 一、单克隆抗体的产生? 二、单克隆抗体的纯化? 三、单克隆抗体的性质鉴定? 四、单克隆抗体的特性Р基因工程抗体制备?一、基因工程抗体种类?二、原理?三、重组抗原制备过程Р基本概念Р抗原决定簇(抗原表位)?细胞克隆?多克隆抗体?单克隆抗体Р是指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团,又称表位(epitope).Р由一个B淋巴细胞增殖而成的细胞集团Р针对多种抗原决定簇的混合抗体Р由单个B细胞克隆产生的针对单一抗原决定簇的同源抗体Р杂交瘤技术的理论基础Р淋巴细胞产生抗体的克隆选择学说,即一种克隆只产生一种抗体?细胞融合技术产生的杂交瘤细胞可以保持双方亲代细胞的特性?利用代谢缺陷补救机理筛选杂交瘤细胞,并克隆化,制备McAb?当两个细胞紧密接触时,细胞膜可能融合在一起。融合细胞含有两个不同的细胞核,称为异核体,产生具有原来两个细胞基因信息的单个核细胞,称为杂交细胞(hybrid cell)。Р杂交瘤技术的基本原理Р杂交瘤技术原理:?聚乙二醇(PEG):细胞融合剂,使免疫的小鼠脾细 胞与小鼠骨髓瘤细胞融合?HAT培养基的选择培养:反复的免疫学检测筛选克隆化增殖的杂交瘤 细胞系?单克隆抗体生成:接种杂交瘤 细胞于小鼠腹腔,腹水中即可得到高效价的单克隆抗体Р不产生Ig的重链和轻链?HGPRT-;TK-?与提供淋巴细胞的动物品系相同Р(一)小鼠骨髓瘤细胞Р动物:?BALB/c小鼠?7~12周龄?20g~25g体重Р(二)免疫脾细胞Р细胞性抗原:?(1~2)×107/只,不加佐剂,2~3周重复一次?可溶性抗原:?首次,完全福氏佐剂+100微克抗原,3~6周100~200微克抗原,融合前3天,加强免疫Р免疫小鼠