物5 μl并加2μl 10×凝胶加样缓冲液,混匀后用移液枪将样品加入样品孔内,一定要包含合适的DNA 分子量标准物。Р7、加样完毕后,关上电泳槽盖,接好电极插头。DNA应向阳极(红色插头)侧泳动。电泳120V约15-20min,其中距离以阳极至阴极之间的测量为准。若电极插头连接正确,阳极和阴极由于电解作用将产生气泡。Р8、当DNA样品在凝胶中迁移足够距离时,关上电源并取出凝胶在紫外凝胶成像仪上观察并拍摄。Р六【注意事项】Р1、注意溴化乙锭(EB)是一种强诱变剂,有致癌嫌疑,操作过程戴手套,并注意把实验中沾染EB和未沾染EB的实验器具分开,防止EB交叉污染,万一接触了溴化乙锭,立即用大量的水冲洗。Р2、配胶和灌电泳槽需使用同一批缓冲液。因为pH或离子强度很小的差别也会在凝胶前部造成紊乱,严重影响DNA片段的泳动。Р3、微波炉加热时间过长,琼脂糖溶液会变得过热或剧烈沸腾。应调整好加热所有琼脂糖颗粒完全溶解需要的最短时间。Р4、溴酚蓝与0.5kb大小的DNA的泳动度相近,这可给泳动最快的DNA片段提供一个指示。Р5、凝胶要用于印迹分析或将要回收DNA条带时,每个样品必须使用一个新的枪头。Р6、影响DNA 的迁移率的因素:Р(1)DNA分子大小:DNA分子越小,迁移越快。Р(2)DNA分子构象:共价闭环DNA>线形DNA>开环双链DNA。Р(3)琼脂糖浓度:其浓度越低,迁移越快。Р(4)两极间电压:电压越高,迁移越快。Р7、DNA区带不清晰,有可能是点样量少或过大,但也有可能是电压过高、凝胶有气泡、凝胶孔破裂的原因。Р8、为了消除RNA的影响,可以在电泳前加RNA酶(约每10μL DNA加1μL RNA酶),37℃水浴30min。Р9、在进行电泳的过程中,溴酚蓝有可能会变黄,这是由于电泳液使用过久或残留在电泳液中的凝胶变质引起DNA 结构改变或丢失。时常更换电泳液和刷洗电泳槽即可。
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