分子手术刀。② DNA 连接酶——基因工程的分子缝合针。(2) 限制酶与 DNA 连接酶的关系①限制酶不切割自身 DNA 的原因是:原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。② DNA 连接酶起作用时不需要模板。 2.载体(1) 作用①作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞内。②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。(2) 具备的条件①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。②有多个限制酶切割位点,以便与外源基因连接。③具有特殊的标记基因,以便进行筛选。(3) 种类①质粒:一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核 DNA 之外,能够自我复制的很小的双链环状 DNA 分子。②λ噬菌体的衍生物。③动植物病毒。【友情提醒】①一般来说,天然载体往往不能满足人类的所有要求,因此人们根据不同的目的和需要, 对某些天然的载体进行人工改造。②限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外,这样才能保证标记基因的完整性,有利于对目的基因的检测。【例1】下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述,错误的是() A .一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B.限制性核酸内切酶的活性受温度影响 C.限制性核酸内切酶能识别和切割 RNA D .限制性核酸内切酶可从原核生物中提取 C 【解析】本题考查基因工程中工具酶的有关知识。大部分酶的化学本质是蛋白质,少数酶的化学本质是 RNA 。酶的活性受到温度和 pH 的影响;限制性核酸内切酶的特点是能识别双链 DNA 中特定的核苷酸序列, 可在特定的位点进行切割;限制性核酸内切酶主要是从原核生物体内分离出来的。二、基因工程操作程序 1.目的基因的获取。(1) 从自然界中已有的物种中分离出来,如从基因组文库或 cDNA 文库中获取。(2) 人工合成目的基因。(3) 利用 PCR 技术扩增目的基因。 2.基因表达载体的构建
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