作者:孙梦瑶吕社民单位:西安交通大学医学部第二十五章基因结构功能分析?和疾病相关基因克隆鉴定第一节基因结构分析第二节基因功能研究第三节疾病相关基因鉴定克隆原则第四节鉴定克隆疾病相关基因的策略和方法重点难点熟悉了解掌握鉴定基因顺式作用元件的基本技术;检测基因表达丰度的技术及原理;分析表达产物的主要技术;基因功能研究的方法技术。疾病相关基因鉴定克隆原则;克隆疾病相关基因的策略和方法。利用基因编辑技术鉴定基因功能。基因结构分析第一节一、鉴定基因的顺式元件是了解基因表达的关键基因的顺式元件包括基因编码区启动子区转录起始点的确定其他顺式作用元件(一)确定基因编码区分析技术1.用数据库分析基因编码序列2.用cDNA文库法分析基因编码序列3.用RNA剪接分析法确定基因编码序列cDNA末端快速扩增(RACE)技术是高效钓取未知基因编码序列的一种方法。选择性剪接的转录产物可以通过基因表达序列标签(expressionsequencetag,EST)的比较进行鉴定。在基因数据库中,初步明确基因的编码序列,并可对其编码产物的基本性质进行分析。(二)基因启动子结构分析技术DNaseI足迹法的原理(三)基因转录起点分析技术转录起点(transcriptionstartsite,TSS)5’-RACE鉴定TSS的原理二、检测基因的拷贝数是了解基因表达丰度的重要因素DNA印迹是根据探针信号出现的位置和次数判断基因的拷贝数实时定量PCR是通过被扩增基因在数量上的差异推测模板基因拷贝数的异同DNA测序是最精确的鉴定基因拷贝数的方法三、分析基因表达的产物可采用组学方法和特异性测定方法基因表达产物包括RNA和蛋白质/多肽,因此分析基因表达可以从RNA和蛋白质/多肽水平上进行。
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