双尾。3.4试验方法3.4.1DNA提取经我院医学伦理委员会审批并征得患儿监护人的知情同意,根据分组标准收集200例接受HD-MTX化疗治疗后24小时、48小时的ALL患儿的全血标本分别2ml于含抗凝剂的采血管中。使用TIANampBloodDNAMidiKit试剂盒提取DNA。TIANampBloodDNAMidiKit1)向15ml离心管加入200ulProteinaseK(20mg/ml)溶液;2)处理材料:直接加入2ml血液样本,混匀;3)向装有血液样本的离心管加入2.4ml缓冲液GE,振荡30sec混匀;4)65℃放置10min,每隔3min振荡一次,以助裂解。简短离心以收集管盖内壁的水珠(如遇特殊样本,未能很好裂解,请适当延长孵育时间);5)向样本中加入2ml无水乙醇,混匀,此时可能出现絮状沉淀;6)将上一步所得溶液和絮状沉淀的一半转移至一个吸附柱CB5中(吸附柱放入15ml收集管中),3000rpm(~1850×g)离心3min,倒掉废液,将吸附柱CB5放回收集管中;7)将步骤6剩余的溶液再转入同一个吸附柱中,重复步骤6操作;8)向吸附柱CB5中加入2ml缓冲液GD,5000rpm(~4500×g)离心1min,倒掉废液,将吸附柱CB5放回收集管中;9)向吸附柱CB5中加入2ml缓冲液PW,5000rpm(~4500×g)离心1min,倒掉废液,将吸附柱CB5放回收集管中;10)向吸附柱CB5中加入2ml缓冲液PW,5000rpm(~4500×g)离心15min,丢弃收集管,将吸附柱CB5放到一个新的15ml离心管中;11)向吸附膜的中间部位悬空滴加300ul洗脱缓冲液TB,室温放置5min,5000rpm(~4500×g)离心2min,将溶液收集到离心管中。3.4.2基因分型运用多重PCR-SNP技术对患儿MTHER、ABCB1及SLC19A1进行基因分型。
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