新鲜培养物1白金耳至改良马丁培养基中,23~28℃培养24~48小时,所得培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10 -6~10-7,制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。Р5.2.3上述制备的菌液,一般当日使用。Р5.5 直接接种法Р以无菌操作取6管需气菌、厌气菌培养基,其中4管接种供试品各1ml, 1管接种金黄色葡萄球菌液1ml,作阳性对照, 1管加1ml0.9%无菌氯化钠溶液,作为空白对照。取4管真菌培养基,其中2管接种供试品各1ml,1管接种白色念珠菌液1ml,作为阳性对照,1管加1ml0.9%无菌氯化钠溶液,作为空白对照。轻轻摇动,使供试品与培养基混合。需气菌、厌气菌培养基管置30-35℃、真菌培养基管置20-25℃,培养14日。在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。阳性对照管培养48~72小时应生长良好。如在加入供试品后,培养基出现浑浊,培养7天后,不能从外观上判断有无微生物生长,可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或斜面培养基上继续培养,细菌培养2日,真菌培养3日,观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长,或用接种环取培养液涂片,染色,用显微镜观察是否有菌。Р5.6 结果判定Р?若供试品管均澄清,或虽显浑浊但经确认无菌生长,判定供试品符合规定;若供试品管中任何一管显浑浊并确认有菌生长,判供试品不符合规定,除非能充分证明实验结果无效,即生长的微生物非供试品所含。当符合下列至少一个条件式,方可判断试验结果无效:Р无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求;Р回顾无菌试验过程,发现有可能引起微生物污染的因素;Р阴性对照管有菌生长;Р供试品管中生长的微生物经鉴定后,确证是因无菌试验中所使用的物品或无菌操作技术不当引起的。Р试验若经确证无效,应重试。重试时,重新取同量供试品,依法重试,若无菌生长,判定符合规定;若有菌生长,判定供试品不符合规定。
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