通入培养器夹层或者内置冷却系统中循环,使培养基降温至24℃~28℃。注意降温过程中要及时向培养器内通风防止罐压回零。Р固体专用种并瓶Р选择无污染、菌丝生长正常、质量合格的固体专用种进行并瓶。并瓶应在无菌室或超净工作台内按无菌操作要求进行。Р接种Р 利用火焰保护接种法,把火圈放在投料口的上方点燃,此时打开进料口盖,把并瓶后的专用种迅速投入罐中,然后,迅速把上料口盖盖好,拧紧。移走火焰圈,接种完毕。液体种进入培养阶段。Р液体菌种培养条件Р调节通风量Р 通过进气阀和排气阀将通风量调节至1:0.5V/V~1.2V/V(料液体积/空气体积)。Р调节罐压Р 调节罐压保持在0.02Mpa~0.04Mpa之间。Р培养温度Р 常见品种培养温度调节在24℃~28℃范围内。少数品种根据特殊需求具体设定。Р培养时间Р 一般品种在上述条件下培养3d~5d可达到放罐指标。经镜检等方法检验质量合格即可放罐接种。特殊品种的放罐菌龄,可根据该品种在培养器内菌丝的生长发育状态和其它理化指标变化情况具体确定。Р留样与检测Р留样Р①并瓶后的菌种样品;②培养器灭菌后的空白培养基样品;③培养过程中定期从培养器中取出的样品,用作镜检和其它理化指标测定。上述样品放冰箱内保存一周以上。Р无菌检测Р对上述留存样品应在无菌检测琼脂平板上划线培养,在28℃恒温培养2d~5d,每天观察菌落生长情况,若划痕上没有细菌、霉菌、酵母菌菌落生长,则表明该样品无杂菌。对留样样品③应在取样后及时镜检,确定菌丝生长发育状态和有无杂菌污染。РpH值Р采用酸度计测定,应在规定范围之内。Р菌丝湿重Р采用Φ15cm的定量滤纸,将100ml液体菌液,过滤至无水滴滴下,称重后减去滤纸湿重。Р镜检Р采用显微镜,低倍、高倍、油镜,观察菌丝生长状况和有无杂菌污染。Р液体菌种放罐指标Р感官指标见表1Р感官指标Р 项目Р指标Р菌液色泽Р球状菌丝体呈白色,滤液呈棕色。
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