样本的内标失败率在4%~7.2%,高于COBAS的失败率(1.7%,1/60)。掺入内标的量大多为5×103 左右,我们采用PEG和直接加入两种方法对2×103 的HBV阳性血清进行96孔重复核酸提取,失败率均为0。内标现在有两类,一类是内标定量,罗氏COBAS®TaqMan®就是内标定量,在每管里都有一个内标,该内标是一定量的,它来做为一个定量点,标本扩增曲线的Ct值和内标按照3.3的一个比例关系来进行内标定量。另一类是提取内标,国内现有的内标都不是定量内标,而是提取的内标,也就是在提取的过程中加入一个定量的内标和要提取的标本同时进行提取。对内标的要求本应是核酸的模板是多少量,内标应该也加多少,做到公平竞争。而实际上要测的模板的量未知,因此很难做到加入多少内标。而现在大多数都加入等量内标,来测不同含量的标本里的核酸的量。因此就出现了,比如1×106 的模板核酸的标本,用5×103 次方的内标时,出现内标失败。虽然认为污染也不会污染到1×106 ,但毕竟内标的失败也就失去了意义。同样的实验也发现5×103 的内标它可以抑制1×102 的模板的扩增。由此看来高核酸模板的标本,可以抑制内标的扩增。而低含量模板的标本,又会被内标的扩增抑制,因此内标严重影响了扩增的敏感性。临床基因扩增实验室近年来在我国发展很快,基因诊断技术在疾病的预防、诊断、治疗方面起到了积极的作用。由于基因扩增检测技术的应用对实验室的环境条件、仪器设备、试剂耗材、人员技术能力和质量控制等方面要求严格。为了规范实验室,保证基因扩增技术有效应用,防止假阴性、假阳性结果的报出,为临床出具合格而可靠的报告,规范临床基因扩增实验室是必然而且也是必要的。1、荧光PCR仪器的功能模块分为(d)A、温度模块B、光学模块C、软件模块D、以上都对 2、按照操作说明进行操作,但环节控制、环节间衔接和防污染意识差的实验室人员属于(a)
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