?Proteomics,互作蛋白组学);а• 3、研究这些所有的蛋白的翻译后修饰变化情况( Post translational proteomics,修饰蛋白组学);а• 4、研究这些表达的蛋白的三维结构与功能的关系,为可能的药物靶点研究提供依据( Structure Proteomics);а• 5、寻找可靠的生物标志物( Biomarker);Р蛋白质表征:传统手段 vs 蛋白质组学分析Р传统手段Р质谱手段Р蛋白质组学能够高通量、高灵敏、高可信度地分析复杂样本Р为何要研究蛋白质组学?Р为何要研究蛋白质组学?Р蛋白质是生命活动的直接承担者,且传统的蛋白质研究方法已经不能满足后?基因组时代\大数据时代的研究要求。Р 生命现象的发生往往是多因素影响的,必然涉及到多个蛋白质;Р 多个蛋白质的参与是交织成网,或者平行发生的,或者是联级反应;Р 在执行生命功能时蛋白质的表现是多样的、动态的、时空性的,并不像基因组那样一成不变;Р 要对生命的复杂过程有全面的认识,必须要在整体、动态和网络的水平对蛋白质进行研究。Р蛋白质组学的研究流程Р1. Bottom up(常规成熟的蛋白组学手段)Р2. Top DownР从完整蛋白角度分析蛋白,不丢失任何序列和修饰信息;? 识别蛋白异构体,了解序列剪切和修饰调控、变化情况。РNano-LCР酶解示意图Р蛋白酶的选择Р最为常用的蛋白酶: Trypsin(胰蛋白酶)? ●特异的切断C端为Arg, Lys的肽键?(若Arg, Lys紧跟Proline后面, 酶切效率降低)? ●生成的肽段平均长度为9个氨基酸? ●胰酶酶解生成的肽段至少为2+价,易于离子化Р其他酶:Р蛋白质组学的研究流程---蛋白质酶解Р蛋白质水平预分级Р1. SDS-PAGE胶分离Р2.液相分离Р分子筛、阴/阳离子交换色谱、亲和色谱等等Р蛋白质组学的研究流程---复杂蛋白质组分预分离
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