实验六血清alt活性测定1-课件一、何谓ALT?谷丙转氨酶(glutamicpyruvictransaminase,GPT)丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)复习:反应式大多数氨基酸可参与转氨基作用,但赖氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸除外。二、ALT催化的化学反应:丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+谷氨酸ALT三、ALT的分布:主要分布于肝、肾细胞、心肌细胞等,血清中的含量很低。病变时,细胞受损,血清ALT含量升高。四、ALT测定的临床意义:作为(肝脏)疾病诊断和预后判断的指标之一。五、测定血清ALT的方法:King法(金氏法)Reitman法(赖氏法)Mohun法(穆氏法)1981年全国生化检验方法学讨论会确定用赖氏法(改良)作为临床首选,单位为:卡门氏单位。实验六?血清ALT活性测定?---改良赖氏法一、实验性质:分析性二、目的及要求1、掌握ALT测定的原理及临床意义2、熟习测定的操作方法。丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+谷氨酸ALT(血清)基质液在一定反应条件下(pH7.4,37℃),作用30min:三、原理:α-酮戊二酸丙酮酸+2,4二硝基苯肼α-酮戊二酸-2,4二硝基苯腙丙酮酸-2,4二硝基苯腙两者在碱性条件下呈红棕色,等摩尔浓度条件下,丙酮酸OD值大a-酮戊二酸3倍。四、试剂:省略2、按下表操作:加入物(ml)对照管(B)测定管(U)血清0.10.1基质缓冲液—0.5混匀,37℃水浴30min(准确记时)2,4—二硝基苯肼溶液0.50.5基质缓冲液0.5—混匀,37℃水浴20min;各管加入0.4MNaOH5.0ml,室温放置10min;在波长505nm处,以蒸馏水校正零点,读取各管吸光度;根据(AU--AB)标准曲线,得到酶活性的卡门氏单位数。1、将基质缓冲液和血清在37℃水浴箱预温5min。五、操作步骤:
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