成高铁血红蛋白,-)结合,生成稳定的复合物氰化高铁血红蛋白(hemoglobin cyanide,)。棕红色的氰化高铁血红蛋白在波长540nm处有吸收峰,可用校准的高精度分光光度计进行直接测定,参考液进行比色法测定,根据标本的吸光度即可求出血红蛋白浓度。Р新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室Р【材料】? 1.器材:采血针、试管、刻度吸管、微量吸管、吸头、分光光度计。? 2.试剂:氰化高铁血红蛋白()转化液(文齐液)Р新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室Р【实验方法】?(1) 取血20μl,加入5ml转化液中充分混匀,静置5min。Р(2) 分光光度计,波长540n m处,光径(比色杯内径)1.0厘米,HiC N 转化液或蒸馏水调零,测定吸光度(A)。Р(3) 计算:?Hb(g/L)=测定管吸光度×64458/44000 ×251=测定管吸光度×367.7。? ?注:式中:64458是国际公认的血红蛋白分子量,64458mg/L即为1mmol/L血红蛋白的物质浓度,除以1000换算为g/L。? 44是1mmol/L血红蛋白在1.00cm光径,540nm条件下的吸光系数。251是稀释倍数。Р实验内容Р新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室Р实验内容Р分光光度计使用:? 1.打开722分光光度计的开关,将比色池的盖子打开,通电20分钟使仪器预热。?以722型分光光度计为例,其基本的操作步骤为:? 2.将波长旋至测定的波长。Р新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室Р新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室Р3.将空白液、校准液或待测液放入比色池,将空白液置于光路中。Р新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室Р4.将开关置于T位,打开比色池盖子,用光量粗调和光量细调调节T为0.0,关上比色池盖子,调节T为100.0。Р新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室
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