PCR技术基因扩展技术

基因扩增技术--PCRРPCR概述?PCR技术方法?常见PCR类型及应用Р摘要Р一、PCR概述Р定义:PCR技术又称聚合酶链式反应(polymerase ? chain reaction),是通过模拟体内 DNA 复制? 的方式,在体外选择性地将 DNA 某个特殊区? 域扩增出来的技术。РKhorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。 1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现。Р1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶(Taq)引入了PCR技术。Р1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年。? Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。РPCR历史回顾Р生物样品РDNA片段Р分子生物学Р微生物学Р基因工程产品Р法医学检测Р人类遗传学研究Р……РPCR技术诞生所依赖的社会需求和研究需要Р二、PCR的技术方法РPCR反应原理РPCR反应条件РPCR条件优化РPCR的影响因素Р①模板:单链或双链DNA?②引物:15-30 bp合成的寡核苷酸?③DNA聚合酶:耐热的DNA聚合酶?④底物:四种脱氧三磷酸核苷? (dNTP: dATP、dTTP、dCTP、dGTP)?⑤ Mg2+: DNA聚合酶的激活剂РPCR基本要素РPCR反应条件Р总体积 50-100 l? ①缓冲液 10 l? ②dNTP(底物) 各200mol/L? ③引物 10~100pmol ? ④模板 0.1~0.2g? ⑤DNA聚合酶 2.5 lР反应体系РPCR反应条件Р模板DNAР95℃Р(1)、高温变性РPCR反应原理РPCR的基本原理РPCR反应条件?PCR过程?PCR的特点Р50℃Р引物1Р引物2РDNA引物РPCR反应原理Р(2)、低温退火