分析等。本区是最主要的扩增产物污染来源,因此,必须注意避免通过本区物品及工作服将扩增物带出。在使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时,必须使用洗板机洗板,废液必须收集在1moL/LHCL中,不能在实验室内倾倒,应当远离PCR实验室的地方弃掉。用过的吸头也必须放在1moL/LHCL中侵泡后再放到废弃物容器或垃圾袋中按程序处理。2.5.8工作结束过后,须对工作区进行清洁处理:对工作区域的实验台面进行清洁消毒(如使用次氯酸钠),实验台面采用紫外线照射更为方便、效果更佳。由于紫外线照射的距离和能量对于去污的效果非常关键,可使用移动紫外线灯(254nm波长),在工作完成后调至实验台面上60-90cm范围内照射。由于扩增产物仅几百和几十碱基对(bp),对紫外线损伤不敏感,因此紫外线照射扩增片段必须延长照射时间,最好是照射过夜。由于本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,如溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等,故应当注意实验人员的安全防护。3.PCR实验室建设与装修3.1根据使用采用仪器的不同确定五个或四个或三个或二个区域,各区域必须设置缓冲间,缓冲间宜设正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内,以减少室内外空气交换。也可设专用走廊,但缓冲间比专用走廊更为重要。3.2PCR实验室空气流向,可按照试剂储备和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区方向进行空气压力递减方式控制气流流向,防止扩增产物顺空气气流逆向进入扩增前的区域。也可通过负压排风装置、排风扇或其它可行的方式进行。3.3压差与净化级别3.3.1试剂贮存和准备区、样品处理区应设微正压,以防止外界核酸气溶胶的进入,造成污染,可以通过空气进风风量的大于排风量达到正压效果。3.3.2核酸扩增区、产物分析区应设微负压,防止含核酸的气溶胶扩散出去而污染试剂与样品,造成假阳性结果,可以通过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。
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