PCR技术

PCR技术目的学习并掌握聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)的原理及技术掌握PCR仪的操作方法聚合酶链式反应(polymerasechainreaction),即PCR技术,是美国Cetus公司人类遗传研究室的科学家K.B.Mullis于1983年发明的一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。原理PCR是体外酶扩增特定DNA片段的快速方法。其特点是利用耐热的DNA聚合酶,将引物和目标DNA混合,经过高温变性、低温退火和适温延伸3个过程为周期进行循环,将目标DNA在短时间内得到大量扩增。原理1.模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;原理2.模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;原理3.引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。原理原理4.在合适的条件下,这种循环不断重复,前一循环的产物DNA可作为后一循环的模板DNA参与DNA的合成,使产物DNA的量按2n方式扩增。理论上讲经过30次扩增反应,DNA扩增倍数为106~109。因此可用微量样品获取目的基因。仪器设备及药品仪器设备:PCR仪,电泳仪,水平电泳槽,紫外透射仪,凝胶成像系统,微波炉,电冰箱,各种容量瓶,试剂瓶及烧杯,磁力搅拌器,旋涡混合仪,0.2mlPCR反应管。