底物浓度、抑制剂、温度、pH和激活剂等因素对酶促反应速度的影响。Р酶的动力学研究包括哪些内容?Р重要Р3Р3.1 酶催化反应速度——酶活力Р如果我们以产物生成量(或底物减少量)来对反应时间作图,可以得到图3-1所示的曲线图。Р图3-1 酶促反应的速度曲线Р4Р引起酶促反应速度随反应时间延长而降低的原因很多,如底物浓度的降低、产物浓度增加从而加速了逆反应的进行、产物对酶的抑制或激活作用以及随着反应时间的延长引起酶本身部分分子失活等等。因此可以用测定反应初速度的方法来测定相关制剂中酶的含量。Р为什么斜率会下降?Р5Р酶活力测定时需注意哪些问题?Р1 选择反应的最适温度,根据不同的底物和缓冲液选择反应的最适pH。?2 速度要快,取反应的初速度?3 底物浓度要足够大(一般在10Km以上)?4 必要的样品处理:排除干扰、加激活剂Р6Р测定酶活力的基本原理Р酶蛋白的含量很低,很难直接测定其蛋白质的含量,且常与其他各种蛋白质混合存在,将其提纯耗时费力。故不能直接用重量或体积等指标来衡量。?测定产物增加量?测定底物减少量Р7Р测定酶活力常用的方法有哪些?Р分光光度法(spectrophotometry)?荧光法(fluorometry)?同位素法(isotope method)?电化学方法(electrochemical method)?其他方法:如旋光法、量气法、量热法和层析法等Р8Р3.2 底物浓度对酶促反应速度的影响Р中间络合物学说(公式)——中间络合物学说也称酶底物中间络合物学说,最早是由Henri和Wurtz两位科学家提出的。在1903年,Henri在用蔗糖酶水解蔗糖实验研究化学反应中底物浓度与反应速度的关系时发现,当酶浓度不变时,可以测出一系列不同底物浓度下的化学反应速度,以该反应速度对底物浓度作图,可得到如图3-2所示的曲线。Р9Р图3-2 底物浓度对酶促反应速度的影响Р10
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