酶催化反应速率与酶活力的测定Р酶活力是指酶催化某一化学反应的能力,其大小可以用在一定条件下该酶所催化的某一化学反应的反应速度(reaction velocity)来表示,酶活力的高低和化学反应的反应速度的大小两者呈线性关系。Р1.1酶催化反应速率随时间的变化Р酶催化的反应速度可用在单位时间内底物的减少量或者产物的增加量来表示。如图3-1所示的曲线图。?酶促反应速度随反应时间延长而降低。Р图3-1 酶促反应的速度曲线Р(1)底物浓度的降低、产物浓度增加从而加速了逆反应的进行;?(2)产物对酶的抑制作用;?(3)随着反应时间的延长引起酶的部分失活等。Р引起酶促反应速度随反应时间延长而降低的原因?Р测定反应初速度的方法来测定相关制剂中酶的含量(活性)。Р如何避免影响?Р1.3酶活力测定时需注意:Р(1)选择反应的最适温度,根据不同的底物和缓冲液选择反应的最适pH。?(2) 速度要快,取反应的初速度?(3) 底物浓度要足够大(一般在10Km以上)?使酶被底物饱和,以充分反映待测酶的活力Р2 底物浓度对酶促反应速度的影响Р2.1中间络合物学说Р中间络合物学说最早是由Henri和Wurtz两位科学家提出的。?在1903年,Henri在用蔗糖酶水解蔗糖实验研究化学反应中底物浓度与反应速度的关系时发现,当酶浓度不变时,可以测出一系列不同底物浓度下的化学反应速度,以该反应速度对底物浓度作图,可得到如图3-2所示的曲线。Р图3-2 底物浓度对酶促反应速度的影响Р根据这一实验结果,Henri和Wurtz提出了酶促化学反应的酶底物中间络合物学说。该学说认为:当酶催化某一化学反应时,酶(E)首先需要和底物(S)结合生成酶底物中间络合物即中间复合物(ES),然后再生成产物(P),同时释放出酶。该学说可以用下面的化学反应方程式来表示:Р酶底物中间络合物学说РE + SРk1Рk2Рk3РESРE + P
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