酶与蛋白质因子等。РPCR是在试管中进行DNA复制反应,基本原理与体内相似,不同之处是耐热的Taq酶取代DNA聚合酶,用合成的DNA引物替代RNA引物,用加热(变性)、冷却(退火)、保温(延伸)等改变温度的办法使DNA得以复制,反复进行变性、退火、延伸循环,就可使DNA无限扩增。将扩增产物进行电泳,经溴化乙锭染色,在紫外灯照射下一般都可见到DNA的特异扩增条带。Р二、PCR技术工作流程及注意事项Р(一)PCR实验室的布局? ? PCR只需几个DNA分子作模板就可大量扩增,应注意防止反应体系被痕量DNA模板污染和交叉污染,这也是最容易造成假阳性原因之一。实验室布局应重点考虑避免这种污染。因此用于PCR检测的实验室要进行功能区域划分,从对环境要求的严格程度和功能上可将PCR整个实验流程划分为四个区域:? 1.配液区(准备区)? 2.模板提取区? 3.PCR扩增区? 4.电泳区Р(二)各区操作注意事项Р下述操作在该区进行:? 储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。?在本区的实验操作过程中,必须戴手套并经常更换。?操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。?工作结束后必须立即对工作区进行清洁。?实验室及其设备的使用必须有日常记录。Р1. 配液区(准备区)Р4.电泳区Р下述操作在本区内进行:扩增片段的测定。Р本区是最主要的扩增产物污染来源,因此必须注意避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出。Р本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、丙稀酰胺、甲醛或同位素等,应注意实验人员的安全防护。Р本区如采用负压或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前面区域的可能性。Р(三) PCR实验室设置的原则Р注意:Р唯一流向制度问题:要求物流、人流均应严格遵守1→ 2→ 3→ 4路线,严禁倒流。? ?物品的专用与移动问题:移液器、吸头和离心管等为PCR专用,各区之间勿串用
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