PCR实验

肉眼能直接观察和判断;可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。Р前言Р主要内容РPCR技术简史?PCR的原理?PCR的反应体系和方法?PCR的类型和应用Р1953年,Watson和Crick提出DNA双螺旋结构及半保留复制模型。?1958年,Meselson和Stahl用实验证实DNA半保留复制模型。? 20世纪60年代末70年代初,人们致力于研究基因的体外分离技术。但是,由于核酸的含量较少,一定程度上限制了DNA的体外操作。?70年代以来,人们采用两种思路去尝试建立基因的无性繁殖体系,一是基因克隆技术,二是体外扩增技术。Р一、PCR技术的发展历程РDNA的复制РTAGCР5’Р3’РTAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCGР3’Р5’Р解旋酶Р解链酶РDNA?解旋解链Р合成引物Р子链延长РTAGCР5’Р3’РTAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCGР3’Р5’РDNA?解旋解链Р合成引物Р子链延长РGGAUCGР5‘РAUCGCGР5‘Р引物酶Р引物酶РRNA引物РRNA引物РDNA的复制РTAGCР5’Р3’РTAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCGР3’Р5’РDNA?解旋解链Р合成引物Р子链延长РGGAUCGР5‘РAUCGCGР5‘РTAGCGCTATCGCATCGACGCTР3’РATAGCGTAGCTGCGAGGATCGР3’РDNA?聚合酶РDNA?聚合酶РDNA的复制Р1971年,Khorana(美国MIT教授,1968年诺贝尔医学奖得主)提出:经过DNA变性,与合适引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因。?但由于测序和引物合成的困难,以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能,所以,Khorana的设想被人们遗忘了……Р核酸体外扩增的设想