组织培养细胞染色体的制备Р实验五Р实验目的?实验原理?实验试剂与仪器?实验步骤?注意事项Р了解组织细胞的培养方法。?掌握染色体标本的制备方法。Р一、实验目的Р二、实验原理Р二、实验原理Р处于指数生长期的细胞,经过短期培养后,用秋水仙素处理,可把细胞分裂阻截在中期,再经过低渗、固定、滴片和染色,就可获得大量中期分裂相的细胞,制片后可以清楚地对染色体进行观察。Р1. 秋水仙素? ①阻止微管组装,破坏纺锤体阻断细胞有丝分裂。? ②使染色体收缩成一定的形状。? 目的: 获得大量的中期分裂相细胞。Р2. Carnoy固定液? 新配置的甲醇:冰醋酸混合液(3:1)。? 能迅速穿透细胞,将其固定并维持染色体结构的完整性,还能够增强染色体的嗜碱性,达到优良染色效果Р3. 低渗液( 0.075M/L KCl )?低渗的目的是凭借反渗透作用使细胞膨胀(但不破裂)染色体铺展,同时可使粘附于染色体的核仁物质散开,以便能在一个平面上观察所有染色体形态Р4. 染料( Giemsa )? 不是一种单一染料,而是天青、伊红、甘油和甲醇的混合物,配制后原液储存,? 染色后,染色质呈红色,细胞核是蓝色。Р四、实验步骤Р培养液4ml?胎牛血清1mlР培养24小时Р每ml培养液?加1ug?继续培养3-5小时Р培养Р秋水仙素Р培养瓶Р取样Р取1ml培养液于?10ml离心管Р1.Р1000rpm?离心5分钟?弃上清Р离心Р2.Р加KCl 8ml?混匀?37℃处理20分钟Р低渗Р3.
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