l)碘液、 95%乙醇、蕃红红染液?口腔中的细菌Р四、操作步骤Р1、标本片制备? ①取载玻片1块,加1滴生理盐水。用牙签小心轻刮自己舌苔几下,盐水中混匀涂成一薄层。? ②在室温下自然干燥。? ③用片夹夹住玻片通过火焰3次固定标本,自然冷却。Р2、染色Р①初染:在固定好并已冷却的涂片标本上滴加结晶紫染液,要盖满涂膜。约1分钟后,用细水流从玻片的一端把游离的染液洗去。? ②媒染(增加染料与细胞的亲和力):滴加卢戈碘液数滴,作用1分钟后,轻轻水洗。? ③脱色:在玻片上加95%乙醇2~3滴,并轻轻转动玻片数秒钟,使玻片倾斜让乙醇流去,如此重复数次,直至流下的乙醇几乎无色或稍成淡紫色,流水冲洗。? ④复染:滴加稀释复红染液数滴,作用1~2分钟后流水冲洗。Р3、结果判定Р染色完毕,用吸水纸将标本片吸干,玻片上滴加香柏油,油镜观察。注意观察菌体的形态、大小、排列和染色。Р五、注意事项Р1、决定革兰染色成败的关键是脱色程度。?若脱色过度,即使是G+菌,其蓝紫色也会被脱去而染上红色,被误认为是G-菌(假阴性)。若脱色不足,即使G-菌也因蓝紫色被保留而染不上红色,被误认为G+菌(假阳性)。脱色程度又受脱色时间、涂片之厚薄、脱色时载玻片摇晃的快慢及酒精用量多少等因素的影响,无法严格规定。一般可用已知G+菌和G-菌作练习,以掌握脱色时间。当要确证一个未知菌的革兰反应时,应同时另作一张已知G+菌和G-菌的混合涂片,以资对照。Р五、注意事项Р2、涂片以薄而匀为佳,切不可浓厚。? 过于密集的菌体,因脱色不均匀常呈假阳(阴)性。镜检时,要以分散开的细菌着色为准。?3、做革兰染色的菌种,以培养18~24h为宜。? 一般情况下G-菌的染色反应较稳定,不易受菌龄的影响;而G+菌,有的在幼龄时呈阳性,培养24和48h以上,由于细胞老化或死亡也可变为阴性反应。?4、不宜使用放置过久的碘液,以免影响固定结晶紫的作用。
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