将上节课进行细胞爬片的培养皿从培养箱中取出,取出盖片,于小平皿中。(3)37℃预温PEM洗3次(每次1mL)(4)TritonX-100处理约10min(1mL)(5)37℃预温PEM洗3次(每次1mL)(6)37℃预温4%多聚甲醛固定细胞15min(1mL)(7)37℃预温PEM洗3次(8)55nMAlex-phalloidin10μL湿盒中室温染色30min。(避光)(9)在parafilm膜上加PEM,待盖玻片被冲起后,再轻轻揭下盖玻片。(10)37℃预温PEM洗数3次,滴加10μLHo.33342复染色。(11)荧光显微镜下观察并拍照。五、注意事项1.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻。2.注意不要弄碎盖片,分清细胞所在面;3.各步洗细胞要轻,勿使细胞脱落;4.荧光观察注意避光操作,防止荧光淬灭。5.节约试剂。六、实验结果 本次实验我们对CHO细胞爬片结果进行了荧光染色,在荧光显镜下用不同波长的激发光对细胞骨架微丝结构及细胞核进行了观察、拍摄照片并将结果叠加。得到以下的实验现象:图1.CHO细胞微丝荧光染色图图2.CHO细胞核荧光染色图图3.CHO细胞微丝及细胞核荧光染色合成图从拍摄的照片可以较为清晰的看到CHO细胞骨架的微丝被染成了绿色,细胞核被染成蓝色;微丝的形状为长条的纺锤状细丝,遍布整个细胞,在细胞中起到了类似骨架般的支撑作用;细胞核为椭圆形,之后再将两图合成,可观察到细胞核被遍布的微丝结构包围。实验较为成功。在实验时要注意荧光染料均存在淬灭问题,所以要尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。每步洗涤要充分,并吸去水分(但也不要干透),以免稀释下一步的抗体或试剂,这样才能得到清晰的荧光图像。【参考文献】[1]桑建利,谭信.细胞生物学实验指导.北京:科学出版社,2010.[2]北京师范大学生命科学学院.细胞生物学实验.北京:北京师范大学生命科学学院,2015.9.
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