化学毒物的最大剂量除受溶解度大小所限外,应达到最大耐受量。一般情况下,应设3~5个或更多剂量组,剂量覆盖的范围要达到3个数量级以上。同时还应设立阳性对照组和阴性对照组。阳性对照组可用环磷酰胺(50-100mg/kg)或丝裂霉素C(10mg/kg)腹腔注射1次或2次。阴性对照组使用等体积的溶剂。Р4.Р实验步骤Р二、骨髓液的制备和涂片? 试验动物最后一次染毒后,按确定的时间用颈椎脱臼或麻醉的方法将其处死,四肢固定于解剖板,将腹中线被毛浸湿,剖开胸腹部,取下胸骨,擦净血污,剔去肌肉,剪去股骨两端,用小型弯止血钳将骨髓挤于有一滴小牛血清的清洁载玻片上,混合均匀后推片。也可在动物处死后,迅速用手术剪将其两腿股骨取下,剔去肌肉,用生理盐水洗去血污和碎肉,剪去股骨两端,用带针头的2ml注射器吸取小牛血清,插人骨髓腔内,将骨髓冲人离心管,然后用吸管吹打骨髓团块使其均匀,以1000r/min离心10min,弃去多余的上清液,留下约0.5mlР4.Р实验步骤Р与沉淀物混匀后,用滴管吸取并滴一滴在清洁的载玻片上推片。阳性及阴性对照组按上述方法同时进行处理。Р三、固定? 将推好晾干的骨髓片放人染色缸中,用甲醇溶液固定15min,取出晾干。不能及时染色的涂片也应固定后保存。Р四、染色? 将固定晾干后的涂片,用新鲜配制的Giemsa应用液(Giemsa储备液l份加pH6.8的磷酸盐缓冲液9份)染色10-15min,然后冲洗掉玻片上的染色液,置晾片架上晾干。Р4.Р实验步骤Р五、观察计数? 先在低倍镜下进行观察,选择分布均匀,染色较好的区域,再在油镜下观察计数,PCE细胞呈灰蓝色,正染红细胞(NCE)呈橘黄色。细胞中含有的微核多数呈圆形,边缘光滑整齐,嗜色性与核质一致,呈紫红色或蓝紫色。一个细胞内可出现一个或多个微核。计数1000个PCE中含微核的PCE数,并且计数200个细胞中PCE与NCE的比值。
全文预览
