非洲猪瘟病毒P72蛋白单克隆抗体的制备及抗体检测?方法的建立Р研究生:朱红?导师:孙怀昌教授Р研究背景Р是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起猪的一种急性、热性、高致死性的传染病。?强毒株感染的发病率和死亡率可达100%,OIE将其列为国际A类疾病。?在非洲国家广泛流行。?无有效疫苗进行防治。Р非洲猪瘟(African swine fever )Р研究背景Р形态特征(图1)?复制方式:胞浆内?分类:非洲猪瘟病毒科?是唯一一种DNA虫媒病毒Р非洲猪瘟病毒(ASFV)Р下一页Р返回Р有囊膜、二十面体对称、双股DNA 病毒;? 病毒粒子堆积于胞浆中,平均直径200 nm ,结构复杂。中心部为一个电子密度大的类核体,周围为清晰的六角形外壳。? 基因组约为170 ~210kb。Р研究背景Р研究背景РVP72?参与病毒吸附和进入细胞的四种主要蛋白之一。?占病毒粒子蛋白的32%,是一种非常保守的抗原性蛋白,对自然感染具有免疫原性。?是血清学检测的理想抗原。Р研究背景Р常规实验室诊断技术?血吸附试验?敏感猪接种试验?PCR?免疫荧光?ELISAР研究内容一Р非洲猪瘟病毒P72单抗的制备Р技?术?路?线Р抗原的制备Р免疫 BALB/c 小鼠Р融合Р筛选Р鉴定Р免疫原的制备Р重组细菌pGEX-VP72Р表达融合蛋白GST-VP72Р免疫小鼠РSDS-PAGE电泳Р定量РIPTG诱导Р切胶、磨胶
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