实验三?凝聚胺法交叉配血Р医学检验系张晨光Р目的:掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。?原理:聚凝胺分子是带高价阳离子多聚季铵盐,溶解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷,有利于红细胞凝聚,低离子强度溶液也能降低红细胞的Zeta电位,可进一步增加抗原抗体间的吸引力。? 当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时,与红细胞发生紧密结合,此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胺的正电荷,使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开;如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体,加入解聚液可使非特异性凝集消失。Р试验分步原理Р血清Р红细胞悬液Р加入LIMР混合液РPolybrene受体Р血型抗原РIgG抗体迅速致敏Р试验分步原理РPolybreneР上海市血液中心血РPolybrene分子连接到红细胞上Р加入PolybreneР试验分步原理Р离心РPolybrene拉近红细胞间的距离并造成凝集Р1个IgG分子同时连接两个红细胞Р试验分步原理Р加入重悬液减弱了Polybrene的作用Р重悬液Р上海市血液中心血Р加重悬液Р试验分步原理Р已被血型抗体致敏的红细胞不会散开Р阳性结果Р试验分步原理Р未被血型抗体致敏的红细胞很快散开Р阴性结果Р试剂: 凝聚胺试剂盒;生理盐水?器材:小试管、滴管、试管架、记? 号笔、显微镜、离心机。?标本:静脉血。Р操作?1. 取试管两支,标明主侧次侧,主侧管加受血者血清(血浆)1滴,和供血者3~5%红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)1滴,次侧管受血者3~5%红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)l滴,加供血者血清(血浆)1滴。?2. 各加LIM溶液3滴,混合均匀后,再各加Polybrene溶液1滴,并混合均匀,置室温1分钟或参照说明书。?3.普通离心机1000g离心15秒,然后把上清液倒掉,不要沥干,让管底残留约0.1ml液体。
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