基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析重组蛋白的表达表达体系: 表达载体原核受体细胞真核选择表达载体常用的关键元件: 启动子和调节序列(表达强弱、细胞或组织特异性、表达调节等,如本实验的乳糖操纵子。) 融合基因(纯化、标签,或增强蛋白可溶性等。如多聚 His 标签- 6 × His ,便于镍柱亲和层析纯化。 GST 融合蛋白用 GST 柱亲和层析) 分泌信号筛选标记其它 6× His 重组蛋白的纯化亲和层析离子交换层析凝胶过滤层析……本单元实验流程: 细菌( pEF-GFPuv ) 亲和层析 IPTG 诱导细菌总蛋白重组蛋白融合蛋白乳糖操纵子的特性 SDS-PAGE 初步分析实验十实验十重组重组 DNA DNA 在大肠在大肠杆菌中的诱导表达杆菌中的诱导表达一、实验目的二、实验原理三、材料与试剂四、实验仪器五、操作步骤六、注意事项七、实验安排八、思考与讨论一、实验目的?了解和掌握 IPTG 诱导表达的原理。?了解降解物阻遏的现象及其机理。
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